懸浮細(xì)胞的傳代
懸浮細(xì)胞傳代比貼壁細(xì)胞傳代稍微簡(jiǎn)單一些。由于細(xì)胞已經(jīng)在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的懸浮，因此無(wú)需通過(guò)酶的作用使其從培養(yǎng)容器表面脫離，整個(gè)過(guò)程較為迅速，對(duì)細(xì)胞的損傷也較小。懸浮培養(yǎng)時(shí)不進(jìn)行生長(zhǎng)培養(yǎng)基的更換；而是每2到3天加料一次，直到細(xì)胞匯合。可以直接在培養(yǎng)瓶中稀釋細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增，或者也可以從培養(yǎng)瓶中取出一部分細(xì)胞，將余下的細(xì)胞稀釋到該細(xì)胞系適宜的接種密度。懸浮細(xì)胞的傳代后的延滯期一般比貼壁細(xì)胞要短。
懸浮細(xì)胞培養(yǎng)容器
懸浮培養(yǎng)可采用未經(jīng)組織培養(yǎng)處理的無(wú)菌培養(yǎng)瓶（例如：不嗲折流板的搖瓶）進(jìn)行；但是，專為懸浮細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)瓶（攪拌瓶）具有出色的氣體交換功能，可進(jìn)行較大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)。
轉(zhuǎn)瓶有兩種基本設(shè)計(jì)；其培養(yǎng)基由懸掛的攪拌棒或者垂直的葉輪攪拌（即攪動(dòng)）。垂直葉輪的換氣效果更佳。轉(zhuǎn)瓶總培養(yǎng)體積不能超過(guò)轉(zhuǎn)瓶標(biāo)示體積的一半，以便換氣充分（例如：500ml轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)液體不能超過(guò)250ml）。
所需材料
懸浮細(xì)胞傳代流程
所有與細(xì)胞接觸的溶液和設(shè)備均應(yīng)為無(wú)菌狀態(tài)。必須采用正確的無(wú)菌技術(shù)，并且在層流通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。傳代應(yīng)在細(xì)胞處于對(duì)數(shù)期、未達(dá)到匯合狀態(tài)時(shí)進(jìn)行。達(dá)到匯合狀態(tài)時(shí)，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)聚集成團(tuán)塊，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶時(shí)培養(yǎng)基會(huì)變得渾濁。傳代前所建議的大細(xì)胞密度隨細(xì)胞系不同而有所差異。
使用搖瓶進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了利用振蕩培養(yǎng)箱和搖瓶進(jìn)行哺乳動(dòng)物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí)傳代的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體的產(chǎn)品說(shuō)明書。
注：應(yīng)確保搖瓶中無(wú)折流板（即：位于培養(yǎng)瓶底部用于攪動(dòng)的齒形板），因?yàn)檎哿靼鍟?huì)破壞搖動(dòng)節(jié)奏。
注：為了盡量減少細(xì)胞碎片和無(wú)用的代謝副產(chǎn)物在振蕩培養(yǎng)體系中蓄積，每三周（或者必要時(shí)）應(yīng)將細(xì)胞懸液輕輕離心一次，離心力為100×g，時(shí)間為5-10分鐘，然后用新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀。
使用轉(zhuǎn)瓶進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了利用轉(zhuǎn)瓶進(jìn)行哺乳動(dòng)物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí)傳代的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體的產(chǎn)品說(shuō)明書。
請(qǐng)注意細(xì)胞對(duì)物理剪切作用很敏感。應(yīng)確保葉輪可自由轉(zhuǎn)動(dòng)，不會(huì)觸碰到容器壁或底部。葉片頂部應(yīng)稍微高于培養(yǎng)基。以確保培養(yǎng)系統(tǒng)換氣充分。調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)動(dòng)裝置，使葉片不會(huì)觸碰容器和底部。下表列出了不同尺寸轉(zhuǎn)瓶所需的小培養(yǎng)基體積。
我們建議開始旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)時(shí)轉(zhuǎn)瓶容器不要超過(guò)500ml。建議從方法成熟、體積較小的轉(zhuǎn)瓶開始逐步擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模。
注：為了盡量減少細(xì)胞碎片和無(wú)用的代謝副產(chǎn)物在振蕩培養(yǎng)體系中蓄積，每三周（或者必要時(shí)）應(yīng)將細(xì)胞懸液輕輕離心一次，離心力為100×g，時(shí)間為5-10分鐘，然后用新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀。
懸浮昆蟲細(xì)胞傳代的注意事項(xiàng)
雖然昆蟲細(xì)胞傳代的一般步驟與哺乳動(dòng)物細(xì)胞相同，但是這些培養(yǎng)系統(tǒng)的一些關(guān)鍵要求有所不同。為了獲得滿意結(jié)果，實(shí)驗(yàn)中必須嚴(yán)格遵守所用昆蟲細(xì)胞系附帶的操作說(shuō)明。
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