從培養(yǎng)器中吸出沖洗液并丟棄。
向培養(yǎng)瓶中加入預熱的解離劑（例如：胰蛋白酶或tryple™）；試劑量應足以覆蓋細胞層（每10cm2大約0.5ml）。輕輕搖晃容器，使試劑*覆蓋細胞層。
將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約2分鐘。請注意實際孵育時間根據(jù)所用細胞系不同而有所差異。
在顯微鏡下觀察細胞解離情況。如果解離程度未達90％，可將孵育時間延長幾分鐘，每30秒鐘檢查一次解離情況，也可輕輕拍打培養(yǎng)容器以加快細胞解離。
細胞解離程度大于90％時，傾斜培養(yǎng)容器，使細胞上液體盡快流盡。加入所用解離劑兩倍體積的預熱*生長培養(yǎng)基。吹打細胞層表面數(shù)次，使培養(yǎng)基分散。
將細胞轉(zhuǎn)移到15-ml錐形管中，以200×g的離心力離心5至10分鐘。請注意離心速度和時間依細胞種類不同有所差異。
用少體積的預熱*生長培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，取出少量樣品進行計數(shù)。
采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用countess™||自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。必要時，可再次向細胞中加入生長培養(yǎng)基，以便達到所需的細胞溶度，并重新進行計數(shù)。

注：我們建議使用countess™||自動細胞計數(shù)儀測定細胞數(shù)和活細胞百分比。Countess™||自動細胞計數(shù)儀計數(shù)所需的樣本量與您目前使用的血球計數(shù)器所需量相同，且不到10秒鐘即可完成一個樣本的典型細胞計數(shù)，適用于各種真核細胞。

11：將細胞懸液稀釋到該細胞系推薦的接種密度，并將適量體積的細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細胞培養(yǎng)容器中，把細胞放回培養(yǎng)箱。

注：如果使用培養(yǎng)瓶，將其放入培養(yǎng)箱前應將瓶蓋旋松，以便進行充分的氣體交換，除非您使用的是通風式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋。

貼壁昆蟲細胞傳代的注意事項

雖然昆蟲細胞傳代的一般步驟與哺乳動物細胞相同，但是這些培養(yǎng)系統(tǒng)的一些關(guān)鍵要求有所不同。為了獲得滿意結(jié)果，實驗中必須嚴格遵守所有產(chǎn)品附帶的操作說明。

昆蟲細胞應在對數(shù)期傳代。但是，如果培養(yǎng)的是強貼壁性昆蟲細胞，則應在細胞達到匯合狀態(tài)或者剛剛開始從培養(yǎng)瓶底部脫離時進行傳代，因為此時細胞容易脫離。
細胞密度低于匯合狀態(tài)的20％時，細胞生長會受到抑制。健康狀態(tài)的細胞是對數(shù)期收獲的細胞。
培養(yǎng)昆蟲細胞時建議不要二氧化碳交換。
昆蟲細胞應于27℃、非濕化環(huán)境中培養(yǎng)。在避光條件下可將細胞放在操作臺上或者放入抽屜中于室溫下培養(yǎng)。但是，建議使用溫度控制在27℃的環(huán)境。
使用昆蟲細胞的培養(yǎng)基。
在無血清培養(yǎng)條件下，昆蟲細胞與基質(zhì)貼附極為牢固，需要花費較大力氣才能使其脫落。要使細胞脫落，可以采用拍掌的動作快速振搖一下培養(yǎng)瓶。為了避免污染，進行此操作前必須蓋緊蓋子。

警告：建議不要劇烈搖晃培養(yǎng)瓶，因為這樣可能會造成細胞損傷。

PS:如需細胞培養(yǎng)相關(guān)產(chǎn)品，敬請聯(lián)系我司！

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