A7r5大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

A7r5大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

 細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及解決方案:

1)培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決；2)細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決；3)對于生長緩慢的貼壁細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長速度；4)對于生長不均的貼壁細(xì)胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時(shí)(即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白)，此時(shí)可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
細(xì)胞傳代注意事項(xiàng)：①傳代培養(yǎng)時(shí)注意無菌操作并防止細(xì)胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每種細(xì)胞使用一套器材；②每天觀察細(xì)胞形態(tài)，掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn)：健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時(shí)即可傳代；③如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象，應(yīng)立即采取措施，一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基。傳代細(xì)胞的建系和維持：細(xì)胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細(xì)胞種子凍存來實(shí)現(xiàn)。對每一個(gè)細(xì)胞系來說都有其自身的特點(diǎn)，要做好建系的維持必須記錄好細(xì)胞檔案,換液傳代和做好細(xì)胞系的管理工作。培養(yǎng)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇：細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中，儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書
細(xì)胞凍存的步驟：1)選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)；2)去上清液，加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基，于4℃預(yù)冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為5×106～1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細(xì)胞類型來選擇；3)將分裝上述細(xì)胞懸液于2ml凍存管中，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期，同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))；4)將裝好細(xì)胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐；5)細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只凍存管細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。
A431細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：半貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
Y79細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：懸??；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
NCI-H1703細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣；細(xì)胞傳代方法：1：3—1：6傳代，每周換液2—3次
L- cell細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：成纖維細(xì)胞；細(xì)胞傳代方法：1：4-1：10傳代；2-3天換液1次。
HSAS2細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
CaSki細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
NCI-H1792[H1792]細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
JK(Jurkat)細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
3T3swiss細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
Calu-6細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞；細(xì)胞傳代方法：消化20分鐘。1：2。5-6天長滿。
LTEP-P細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
RPTEC/TERT1細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
NCI-H929細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：懸浮生長 ；細(xì)胞形態(tài)特性：淋巴母細(xì)胞樣；細(xì)胞傳代方法：保持細(xì)胞密度在5×105—1×106 cells/ml之間，每周換液2—3次
NCI-H838細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮樣；細(xì)胞傳代方法：1：3-1：6傳代；2-3天換液1次。
FaDu細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮樣；細(xì)胞傳代方法：消化3-5分鐘。1：2。3天內(nèi)可長滿。
U266[U266B1]細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
D283med細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
Pt-K2(PtK2)細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
CAL-148細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
NCI-H498細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：半貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
COLO394[COLO394]細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
SHG44細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
NHEK細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代
PK-15細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
NCI-H1755[H1755]細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
PIG1細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
Hs578bst細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長?。患?xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代
CaSki細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
LS 174T細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
NCI-H295R[H295R]細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
SHEE細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
CHL-1細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞；細(xì)胞傳代方法：1：6—1：10傳代
PE/CA-PJ34(Clone 12)細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮樣；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代
Sall BclxL 50RFP細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：懸浮生長；細(xì)胞形態(tài)特性：淋巴母細(xì)胞；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代
D407細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長?。患?xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代
RIN-m細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
SW948[SW-948]細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
GRC-1細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
Hce-8693細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
NCI-H838細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮樣；細(xì)胞傳代方法：1：3-1：6傳代；2-3天換液1次。
JeKo-1細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：懸?。患?xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
HPDLF細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
HTMC細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
UMNSAH/DF-1細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：成纖維母細(xì)胞樣；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代
NCI-H1648細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁生長；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞；細(xì)胞傳代方法：1：3-1：6傳代
PC-3M-1E8細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
NCI-H2330[H2330]細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
MEG-01細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：懸??；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
USMC細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
NCI-H1385[H1385]細(xì)胞系保種中心；細(xì)胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。